Invitrogen試劑盒的使用需要注意的問題有很多? 各組蛋白樣品濃度已知后,最好要將各組蛋白樣品濃度調到一致;
計算目的蛋白體積時需要注意此時的蛋白濃度是原蛋白樣品濃度的0.8倍,因為蛋白樣品要與上樣緩沖液混合;
吸取上樣緩沖液時要注意是否吸取需要的量,因為有些上樣緩沖液比較厚重難吸;
實驗過程中要注意細致,避免到最后各組蛋白樣品的體積和濃度都不統一。
在低溫條件或長期保存導致BCA試劑出現沉淀時,可攪拌或溫育使溶解,如發現細菌污染則應丟棄。
因為BCA測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,且顯色反應的速度和溫度有關,所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度,否則如需精確測定,每次測定都需重做標準曲線。若需得到更為精確的蛋白濃度結果,每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。
若測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化,原因可能是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。BCA蛋白濃度測定試劑盒對樣品中各種物質詳細的兼容性,參見附件BCA蛋白濃度測定兼容性表。
蛋白標準液的加量應當準確,如果加量不準確,會導致制作出來的標準曲線出現偏差,影響待測樣品的濃度計算,應使用精確度高的移液器。
實驗中,若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可能不適合BCA法測定,可改用蛋白濃度測定試劑盒。